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發(fā)布時間：2021/6/10 8:52:08 閱讀次數(shù)：1449
樣本處理及要求
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20
分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000
×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS （0.01M, pH=7.4）沖洗組織,去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞
會影響測量結(jié)果）,稱重后將組織剪碎.將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量
體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記
錄.推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨.為了進一步裂
解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融.后將勻漿液于5000×g離心5~10
分鐘,取上清檢測.
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯?/p>
于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.訂購聯(lián)系當(dāng)?shù)亟?jīng)銷商 技術(shù):經(jīng)銷商轉(zhuǎn)廠家
注:標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測.
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無
標(biāo)準(zhǔn)品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:48 24 12 6 3 1.5 nmol/L
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中
直接取50μL樣本上樣即可.當(dāng)有部分樣本值超過大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本
進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗.
注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果.所有試劑都必須在使用前達(dá)到室
溫 20-25℃.使用后立即冷藏保存試劑.
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果.在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體.溫育過程中
不要讓微孔干燥掉.
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值.
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用.
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果.
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射.訂購聯(lián)系當(dāng)?shù)亟?jīng)銷商 技術(shù):經(jīng)銷商轉(zhuǎn)廠家
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上.
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體.任何漂白成分都會破壞
試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性.
9. 不能使用過期產(chǎn)品.
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置.
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用.
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃.
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL;空白孔不加.
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體
100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱
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